脑胶质瘤约占中枢神经肿瘤的一半, 临床治疗效果差。尤其是胶质母细胞瘤,其恶性程度极高,预后性差,是威胁人类健康的主要恶性肿瘤之一,因此,,选择一种有效的动物模型是研究脑胶质瘤发病机制及其治疗方法的关键。猪是用于做胶质瘤模型数量最多、用途最广的大动物。猪脑具有脑回,能反映人脑皮质、皮质结构内的肿瘤浸润、药物递送和药物扩散。以下将介绍小型猪用作脑胶质瘤实验动物模型受体动物的实验方法。
实验方法
实验猪提前24个小时禁食,自由采水。实验当天对小型猪进行诱导麻醉,建立耳静脉通道,对颅骨顶部进行备皮,消毒,行气管插管,连接好呼吸麻醉机,使用异氟烷进行维持麻醉,术中进行心电监护和巡回协助。
等待实验猪登录深度麻醉状态后,即可开始手术。从颅顶中线平行矢状缝做5cm长切口,剥离皮下筋膜和结缔组织,暴露颅骨骨面,用3mm电动钻头在颅骨表面做一个小孔,深度到达脑组织硬膜外即可,将脑胶质瘤细胞注射进脑区,缝合颅骨表面结缔组织和皮肤。等待动物苏醒,做好术后护理。
3周后对实验猪脑部进行增强MRI检查,验证肿瘤是否成形,初步评估肿瘤大小。
模型评价
1、动物行为学评价
观察术后实验猪神经系统相关情况:如进食情况、体重、精神状态以及压迫症状( 颅内压增高表现、偏瘫) 等。
2、影像学检查
磁共振成像( MRI) 技术,无创性的影像学检测方法,可在不处死动物的情况下对肿瘤的生长情况进行动态的、多方位的扫查,便于在适当的时间进行药效学研究。
3、病理染色
HE染色后镜下观察,可见肿瘤区较正常脑组织染色深,有较明确的边界。肿瘤细胞丰富、密集,常排列呈束状及小团块状,细胞分化差,胞核大、圆、深染,核分裂象多见。肿块内部血管丰富,常见栅栏状坏死区,瘤周组织可有水肿。Ki-67染色结果可反映肿瘤细胞的增殖能力。