自2013年美国科学家詹姆斯·罗思曼、兰迪·谢克曼及德国科学家托马斯·祖德霍夫因发现细胞的囊泡运输调控获得诺贝尔生理学或医学奖，Exosome研究晋升为科研热点，热度不断攀升，2020 年Exosome相关课题就中标两千余项。下面我们就来聊聊Exosome，干货来了，小伙伴们，接住！

图注：外泌体相关研究近年走势图

首先我们了解下Exosome的相关背景知识：

1什么是Exosome

Exosome（外泌体）是指包含了复杂 RNA（如mRNA、microRNA） 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡，广泛存在于血液、尿液、母乳和细胞培养基等生物体液中。

作为细胞间通讯及物质传递的重要载体，Exosome能调控靶细胞内多种信号通路，并根据来源母细胞类型及携带的蛋白质、不同种类的RNA等组分的差异发挥不同的生物学功能。Exosome与肿瘤转移、细胞通讯、免疫调节、细胞凋亡和自噬、细胞分化、组织再生与修复等密切相关。

Exosome来源：细胞培养液上清、菌液、血清/血浆、尿液、组织样本，盆腔冲洗液、肿瘤囊肿积液、关节冲洗液等。

2Exosome提取

超速离心法是Exosome提取最常用的方法，这种方法硬性条件就是需要有冷冻超速离心机，得到的Exosome量比较多，但是纯度往往不足，电镜时发现Exosome聚集成块，难以判定究竟是微囊泡还是Exosome。

试剂盒提取Exosome操作简单，获取的Exosome纯度与提取效率相对较高，因而受到大多数人的欢迎，尤其适合样本量不大的小伙伴。

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3Exosome鉴定

Exosome提取是第一步，之后需要鉴定，一般为三部曲:

01NTA粒径分析

第一步，NTA粒径分析，纳米颗粒跟踪分析（Nanoparticle TrackingAnalysis,NTA），是对每个颗粒的布朗运动进行追踪，可检测10nm-1000nm范围内的颗粒。

02透射电镜分析

第二步，透射电镜分析，分辨率可达0.1-0.2nm，是Exosome双层囊膜超微结构观测的经典方法。

03标志物鉴定

第三步，标志物鉴定，根据Exosome母细胞来源，优选Exosome标志物抗体，如CD9，CD63，CD81等，通过细胞流式检测以及Western blot检测做进一步鉴定。

04Exosome分析是关键

众所周知，Exosome携带mRNA、miRNA和蛋白质，这些活性物质一旦登录其它细胞，很有可能引起其它细胞功能上的变化。通过高通量测序RNA，可以筛选具有代表性的差异表达的miRNA，做蛋白组学分析，可以研究发现新的蛋白标签。

锁定目标分子，探究机制，一般是通过细胞实验研究其与某种信号通路相关因子的作用关系，然后再在动物体内实验进一步验证。

05临床研究

通过检测对应疾病患者样本中目标分子的表达水平与疾病关系，整理和分析临床病理特征信息，进一步筛选出如具有潜在早期筛查疾病的Exosome标志物等。

总而言之，Exosome研究离不开以下几步：

1、Exosome提取；

2、Exosome鉴定；

3、Exosome功能研究；

4、Exosome携带的分子功能研究；

5、Exosome分子水平的动物实验；

6、临床相关性研究。

目前，Exosome研究已经渗透到生物医学的各个细分领域，比如跟火热的干细胞强强联合，在研究各类疾病模型的治疗作用方面；比如研究植物如姜，金银花提取的Exosome对消化系统及新冠病毒的疗效作用等，毫无疑问，可以占据科研热点的C位了。

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