近年来,小型猪(minipig)在生物医学研究领域的应用快速增长,且遗传修饰猪模型用于糖尿病研究和其他转化医学领域研究发展迅猛。单纯高脂饮食可在猪中诱发肥胖和糖耐量异常等表型,但一般不会导致糖尿病,需要联合应用其他手段破坏胰岛β细胞,比如链唑霉素、四氧嘧啶和基因修饰技术等。为便于小型猪在糖尿病研究领域的推广和应用,灵赋拓普结合自身在动物科研多年从业经验,分享此篇小型猪糖尿病模型。
由于猪没有自发的糖尿病,必须通过外科手术或化学药物来诱发1型糖尿病。STZ对胰岛β细胞具有选择性毒性作用,对动物机体组织的毒性相对较小,动物存活率高,是目前广泛采用的制备动物糖尿病模型的药物。
小型猪糖尿病模型
一、实验材料:
(1)实验动物:巴马小型猪,18-22kg,雄性,6只;
(2)实验材料:链脲佐菌素( streptozotocin,STZ),血糖仪及试纸,胰岛素试剂盒,舒泰50;
(3)客户需求:灵赋拓普提供饲养场地及采购动物,完成巴马猪1型糖尿病模型建立,安乐死及大体解剖尸体处理。
二、实验方法:
糖尿病模型建立
(1)造模方式
6只巴马小型猪采购接收后,进行检疫饲养,实验日期确定后,提前24小时禁食,造模当天随机抽取3只小型猪进行诱导麻醉,建立耳静脉通道,将STZ配制成50ml溶液按照150mg/KG体重剂量4min静脉注射登录巴马小型猪体内。
在应用 STZ 后 6 h 喂饲高糖饲料,1 kg饲料添加 400 ~ 500 g 蔗糖,避免一过性低血糖引起并发症。
另外3只小型猪做为对照组,注射等量生理盐水,正常检测血糖及开展后续体重及糖耐实验。
(2)空腹血糖检测
STZ给药后,分别于0h,2h,4h,6h,8h,10h,12h,14h,16h,18h,20h,22h,24h检测血糖含量。
STZ给药后,分别进行每周两次血糖测试,每次间隔3-4天(初步定在周二,周五),连续检测3周。测血糖前要空腹。
为确保动物存活,在血糖高于20 mmol /L时皮下注射胰岛素 12U,高于 25 mmol /L时注射 20 U。
(3)口服糖耐测试
STZ给药后3周,进行糖耐量测试,空腹口服溶于80-100ml水内的无水葡萄糖粉25g,5分钟内喝完,从口服第一口开始计算,于口服前0h,口服后0.5h,1h,2h采血测试血糖含量。测试过程中,尽量避免动物过激挣扎。
(4)体重检测
STZ给药后,分别进行每周两次体重称量,每次间隔3-4天(初步定在周二,周五),连续检测3周。(先称重在测每周血糖)
糖尿病模型验证
当实验组与对照组给药后血糖和糖耐量实验有显著性差异,血糖稳定在17mmol/L以上,且体重明显下降,则提示模型成功。
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